U početku je Mickeyja Mousea karakterizirala njegova jednostavna, zaobljena figura i velike oči. Iwerks je donio značajnu doradu u Mickeyev dizajn, uvodeći suptilne promjene koje su poboljšale njegovu osobnost i izražajnost. Naglasio je Mickeyjeve uši i dodao crne krugove na njegove oči, dajući liku osebujniji i dražesniji izgled.
Iwerks je također odigrao ključnu ulogu u razvoju ranih Mickey Mouse animacija. On je bio pionir u inovativnim tehnikama kao što su animacija "ravno naprijed" i "od poze do poze", koje su omogućile veću fluidnost pokreta i dinamičniji prikaz lika. Njegov revolucionarni doprinos pomogao je uspostaviti Mickeyja Mousea kao omiljenu ikonu i svjetski kulturni fenomen.