Kirby-Bauer tehnika je standardna mikrobiološka metoda koja se koristi za određivanje osjetljivosti bakterija na antimikrobna sredstva. Uključuje mjerenje zone inhibicije bakterijskog rasta oko diskova impregniranih antibioticima postavljenih na agar ploču inokuliranu testnim organizmom. Ovo su opći koraci Kirby-Bauer tehnike:
1. Priprema inokuluma :
- Dobiva se čista kultura ispitivanog bakterijskog soja i uzgaja u prikladnom mediju bujonske kulture kako bi se postigla logaritamska faza rasta (zamućenje).
- Bakterijska suspenzija je standardizirana na određenu zamućenost, obično ekvivalentnu McFarland standardu zamućenosti od 0,5, kako bi se osigurala dosljedna gustoća inokuluma.
2. Inokulacija agar ploče :
- Za test se koriste sterilne agar ploče koje sadrže Mueller-Hinton agar ili neki drugi odgovarajući agar medij.
- Korištenjem sterilnog pamučnog štapića, standardizirani inokulum se ravnomjerno rasporedi po površini agar ploče kako bi se stvorio konfluentni travnjak rasta bakterija.
- Inokulirana ploča se suši nekoliko minuta kako bi upila višak vlage.
3. Primjena diskova s antibiotikom :
- Sterilni diskovi s antibioticima koji sadrže specifične koncentracije antimikrobnih sredstava stavljaju se na površinu ploče agara u ravnomjerno raspoređenim intervalima pomoću sterilnih pinceta ili dispenzera za diskove.
- Diskovi se lagano pritisnu kako bi se osigurao dobar kontakt s površinom agara bez oštećenja diskova.
4. Inkubacija :
- Inokulirana ploča s diskovima s antibioticima inkubira se na odgovarajućoj temperaturi (obično 35-37°C) određeno razdoblje (obično 16-24 sata) kako bi se omogućio rast bakterija i difuzija antimikrobnih sredstava.
5. Mjerenje zona inhibicije :
- Nakon inkubacije, ploče se ispituju na prisutnost zona inhibicije oko diskova s antibioticima.
- Pomoću ravnala ili digitalnog mjerila mjeri se promjer svake zone inhibicije u milimetrima.
- Promjer zone pokazuje osjetljivost ispitivanog organizma na određeni antibiotik.
6. Tumačenje rezultata :
- Izmjereni promjeri zona uspoređuju se sa standardiziranim tablicama ili smjernicama, poput onih koje je dao Institut za kliničke i laboratorijske standarde (CLSI), kako bi se odredila osjetljivost ili otpornost testnog organizma na testirana antimikrobna sredstva.
- Organizmi se kategoriziraju kao osjetljivi, srednje otporni ili otporni na temelju veličine zona inhibicije i utvrđenih kriterija tumačenja.
7. Kontrola kvalitete :
- Kako bi se osigurala točnost i pouzdanost Kirby-Bauer tehnike, sojevi za kontrolu kvalitete s poznatim obrascima osjetljivosti uključeni su u svaku seriju testiranja za praćenje učinkovitosti metode i korištenih reagensa.
Važno je slijediti standardizirane postupke i tumačiti rezultate u skladu s utvrđenim smjernicama kako biste dobili pouzdane i klinički relevantne informacije iz Kirby-Bauerovog testiranja osjetljivosti na antibiotike.