U drami Macbeth, Lady Macbeth igra ključnu ulogu u smrti kralja Duncana. Ona je ta koja uvjerava Macbetha da ubije kralja, te mu pomaže u planiranju i izvršenju djela.
Nakon što Macbeth izrazi svoje sumnje i strahove u vezi s ubojstvom kralja, Lady Macbeth ga prekori da je kukavica i posrami ga da počini zločin. Ona ističe da je on već imao ideju da ubije Duncana i da samo oklijeva zbog svoje "slabe prirode". Ona ga također podsjeća na njegovu ambiciju da postane kralj i govori mu da mora biti nemilosrdan ako želi postići svoje ciljeve.
Odlučnost i manipulacija Lady Macbeth naposljetku uvjeravaju Macbetha da pristane na njezin plan. Ona iznosi pojedinosti ubojstva, uključujući kako i kada bi trebalo biti učinjeno. Ona također govori Macbethu da ostavi krvave bodeže kraj Duncanova tijela kako bi krivnja pala na kraljevu stražu.
Nakon što je ubojstvo počinjeno, Lady Macbeth je isprva uvjerena da će ga uspjeti zataškati. Međutim, ubrzo počinje pokazivati znakove krivnje i ludila. Postaje opsjednuta krvlju na rukama i ne može spavati. Također počinje imati vizije duha Duncana, koji je optužuje za ubojstvo.
Krivnja Lady Macbeth s vremenom postaje prevelika za nju. Umire u četvrtom činu drame, a njezina je smrt prekretnica za Macbetha. Postaje još nemilosrdniji i tiraniji te na kraju gubi razum.
Uloga Lady Macbeth u smrti kralja Duncana značajna je jer naglašava snagu ambicije i opasnosti dopuštanja nečijim željama da nadvladaju njihova moralna načela. Ona je složen i tragičan lik koji je naposljetku uništen vlastitom ambicijom i krivnjom.